LS8 小鼠成釉細胞(牙釉質(zhì))培養(yǎng)說明

產(chǎn)品貨號ALWS-1847

產(chǎn)品規(guī)格T25

細胞背景：LS8 細胞是一種小鼠成釉細胞樣細胞系，來源于瑞士韋伯斯特（CFW）小鼠的牙釉質(zhì)器官的牙上皮，是由猿猴空泡病毒 40（SV40）轉(zhuǎn)化而來的細胞系，其 NCBI 分類學編號為 1891767。

細胞形態(tài)：形態(tài)：上皮細胞樣，貼壁生長（不牢固，易脫落）。

用途：僅供科研使用。

培養(yǎng)條件：1） 準備 DMEM（A19008）培養(yǎng)基；胎牛血清PRO MAX(HB-FBS-500)，10%；雙抗(H8611)，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為 70%-80%。

該細胞培養(yǎng)過程中貼壁不牢固容易脫落并聚團的特性，培養(yǎng)過程中需要注意：每次重鋪的前 12 小時盡量減少震動，需要安安靜靜的等細胞貼壁。消化過程中 PBS 潤洗后，加入 1ml 0.25%EDTA 的胰酶消化大約 1 分鐘左右，拿出培養(yǎng)箱震蕩，拍打瓶底和側(cè)面，幫助脫落，如有細胞團塊較大，可以通過槍頭吸取消化液輕輕的吹打的方式分散開，避免距離太近沖擊力過大對細胞產(chǎn)生損傷，待細胞分散成單細胞懸液后，3ml 完培終止消化，再離心重懸后鋪瓶。

貼壁細胞參考：

一.消毒靜置等細胞穩(wěn)定后拍照 100X 和 200X。棄去培養(yǎng)上清，用 PBS 潤洗細胞 1-2 次并吸走。

二. T25 瓶加入 0.25％EDTA 胰蛋白酶 1-2ml 于培養(yǎng)瓶中震蕩混勻，如果屬于貼壁不牢固的細胞很容易脫落的就培養(yǎng)箱外面消化震蕩待脫落 90%以上終止消化，一般小于 1 分鐘以內(nèi)，甚至不加胰酶有部分貼壁非常不牢固的細胞也會自然震蕩脫落。如果是貼壁牢固的細胞則置于 37℃培養(yǎng)箱中消化提高效率，每 40-50 秒拿出培養(yǎng)箱震蕩幫助細胞脫落，如脫落 90%以上則對應(yīng) 3-6ml 含有 10%血清的培養(yǎng)基終止，以防胰酶殘留損傷細胞。如果貼壁非常牢固的細胞，脫落的比例比較低，也不超過 2 分鐘后終止消化，再加入 1ml 培養(yǎng)基讓細胞緩沖后再過2 分鐘進行二次消化，反復(fù)分步消化以降低單次消化時長，減少刺激，保護細胞膜。或采用刮產(chǎn)刮細胞的方式處理也可以。總歸原則是達到消化目的的同時減少細胞膜受到的損傷越小越好。

三.消化完成后輕輕吹勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 3-5min，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。將細胞懸液按 1：2 的比例分到新 T25 瓶/6cm 培養(yǎng)皿中，添加 6-8ml 按照說明書要求配置的新的培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按 1:2 和以上比例進行，具體以實際細胞密度決定。期間多的細胞一定保存多份細胞凍存管備種。

這株細胞長勢很塊

 上述為LS8細胞實時出庫圖