ELISA實驗報告

凡購買慧穎生物ELISA試劑盒提供免費代測，如下為實驗原理及操作方法

客戶及指標信息

檢測指標*：                                              

試劑盒來源*：                                                 

前言

酶聯(lián)免疫吸附劑測定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）的基本原理是：①使抗原或抗體結合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性。②使抗原或抗體與某種酶連接成酶標抗原或抗體，這種酶標抗原或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在測定時，把受檢標本（測定其中的抗體或抗原）和酶標抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與其他物質分開，zui后結合在固相載體上的酶量與標本中受檢物質的量成一定的比例。加入酶反應的底物后，底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標本中受檢物質的量直接相關，故可根據(jù)顏色反應的深淺刊物定性或定量分析。

ELISA可用于測定抗原，也可用于測定抗體。該法適于測定細胞培養(yǎng)上清、血清、血漿及組織液中的樣本，干擾小可以測到每毫升納克水平的細胞因子（或受體）的水平。

材料與方法

1 材料

1.1 主要試劑

ELISA檢測試劑盒

1.2 主要儀器及耗材

酶標儀：芬蘭（Labsystems Multiskan MS）公司產(chǎn)品

洗板機：芬蘭（Thermo Labsystems）公司產(chǎn)品

離心機：微量高速離心機（國產(chǎn)）

移液器：吉爾森P型移液器(Pipetman)產(chǎn)品

培養(yǎng)箱：隔水式恒溫培養(yǎng)箱（國產(chǎn)）產(chǎn)品

其他所需耗材均為國產(chǎn)。

2 方法

2.1 實驗過程

（1）標準品的稀釋與加樣：標準品按照說明書稀釋好五個梯度，各個梯度每孔加樣量都為50Μl；

（2）加樣：分別設空白孔、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μL，然后再加待測樣品10μL。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻；

（3）溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30min；

（4）配液洗滌：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用；小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30sec后棄去，如此重復5次，拍干；

（5）加酶：每孔加入酶標試劑50μL，空白孔除外；

（6）溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30min；

（7）洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30sec后棄去，如此重復5次，拍干；

（8）顯色：每孔先加入顯色劑A50μL，再加入顯色劑B50μL，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15min；

（9）終止：每孔加終止液50μL，終止反應；

（10）測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15min以內進行。

2.2  計算

以標準物的濃度為綜坐標，OD值為橫坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。

實驗結果

見Excel附件

文章來源：上海慧穎生物科技有限公司免疫實驗室