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標(biāo)題名稱：MHCC-97H MHCC-97H細(xì)胞 細(xì)胞株培養(yǎng)
細(xì)胞名稱 | MHCC-97H人高轉(zhuǎn)移肝癌細(xì)胞 |
種屬 | 人 |
組織來源 | 肝 |
生長(zhǎng)狀態(tài) | 貼壁生長(zhǎng) |
細(xì)胞形態(tài) | 上皮樣 |
培養(yǎng)條件 | 培養(yǎng)基類型：DMEM（Hyclone SH30243.01)培養(yǎng)基 FBS（德國(guó)SERANAS-FBS-SA-015): 10% 抗生素：雙抗 培養(yǎng)條件：37℃，CO2: 5% |
傳代方法 | 收到細(xì)胞后，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)： 如果沒長(zhǎng)滿，將培養(yǎng)瓶用75%酒精消毒后在超凈臺(tái)內(nèi)更換新鮮培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)。 如果細(xì)胞已經(jīng)長(zhǎng)滿（約80%-90%）則傳代后繼續(xù)培養(yǎng)。 貼壁細(xì)胞傳代方法： 1 棄去培養(yǎng)基，用不含鈣、鎂離子的PBS洗1-2次。 2 加1ml 0.25%的胰酶（含0.02%EDTA），讓胰酶與大部分細(xì)胞接觸后放入37℃培養(yǎng)箱內(nèi)，隨時(shí)觀察細(xì)胞狀態(tài)變化，待細(xì)胞大部分變圓后加*培養(yǎng)基終止消化。 懸浮細(xì)胞傳代方法：可以直接傳代也可以離心法傳代。 1 直接傳代是讓懸浮細(xì)胞慢慢沉淀在瓶底后，將上清吸掉1/2-2/3，吹打細(xì)胞形成細(xì)胞懸液后，分別接種到其他培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。 2離心法傳代是將細(xì)胞連同培養(yǎng)液一并轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)， 1000rpm，5分鐘，去除上清，加新的培養(yǎng)液到離心管內(nèi)，吹打細(xì)胞形成細(xì)胞懸液后，分別接種到其他培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。 一般沒有特殊說明，細(xì)胞一般是一傳二。 |
凍存方法 | 70% *培養(yǎng)基，20%FBS，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。 儲(chǔ)存：液氮中長(zhǎng)期保存。 |
注 | 1 觀察細(xì)胞在低倍鏡下觀察，便于整體估計(jì)細(xì)胞密度。 2 在運(yùn)輸過程中可能會(huì)導(dǎo)致一些貼壁不牢的細(xì)胞發(fā)生部分脫落，可離心吹打后重新種入瓶中培養(yǎng)。 3 收到細(xì)胞后若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、細(xì)胞污染等，請(qǐng)拍照并在三天內(nèi)與我們。 |
注意：我公司所用德國(guó)SERANAS-FBS-SA-015南美血清，細(xì)胞長(zhǎng)勢(shì)很好，凡購(gòu)買我公司MHCC-97H，我公司贈(zèng)送20-50ML試用裝一瓶。
當(dāng)您收到正確產(chǎn)品時(shí)，需要計(jì)數(shù)細(xì)胞以確定其數(shù)量和活性。
這一步驟非常重要，能確定您收到的產(chǎn)品是否合格
1. 在生物安全柜（超凈工作臺(tái)）中，將細(xì)胞混勻。細(xì)胞在1.5ml和2ml試管中的，請(qǐng)選用1000μl的槍頭混勻；在5ml，15ml或50ml的試管中的，請(qǐng)選用5ml的移液管混勻。
2. 從試管中取10μl細(xì)胞樣品，和10μl胎盤蘭混勻后；加入細(xì)胞計(jì)數(shù)板中，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。
選取正確的稀釋倍數(shù)，對(duì)正確計(jì)算細(xì)胞數(shù)量和細(xì)胞活性是非常重要的
試管規(guī)格 | 細(xì)胞量 | 細(xì)胞取樣 | 0.4%臺(tái)盤蘭 | PBS（1×） | 稀釋倍數(shù) |
1.5ml | 0.5-1×106 | 10μl | 10μl | - | 2 |
2ml | 0.5-1×106 | 10μl | 10μl | - | 2 |
5ml | 5×106 | 10μl | 10μl | - | 2 |
15ml | 10×106 | 10μl | 10μl | - | 2 |
15ml | 15-20×106 | 10μl | 10μl | 80μl | 10 |
50ml | 30-100×106 | 10μl | 10μl | 80μl | 10 |
N = 細(xì)胞計(jì)數(shù)板上四個(gè)大格的細(xì)胞量
D = 稀釋倍數(shù)
細(xì)胞數(shù)量和活性計(jì)算公式：
細(xì)胞數(shù)量 = N/4×D×＿ml = ＿ × 104
細(xì)胞活性 = 沒有染上臺(tái)盼蘭的細(xì)胞/全部的細(xì)胞×100%
如果你計(jì)數(shù)的細(xì)胞明顯少于我們聲稱的細(xì)胞數(shù)，請(qǐng)按以下步驟操作：
（1） 檢查細(xì)胞懸液中是不是有細(xì)胞團(tuán)。
如果有的話，請(qǐng)用1000μl的槍頭輕輕吹打混勻后，再次取樣計(jì)數(shù)。
（2） *的細(xì)胞濃度是在計(jì)數(shù)板中的每個(gè)大格里有50-100個(gè)細(xì)胞（總數(shù)200-400）。
如果不是，請(qǐng)做適當(dāng)?shù)臐舛认♂尯螅儆?jì)數(shù)一次。
（3） 請(qǐng)立即與我們。
MCF-10A MCF-10A細(xì)胞 細(xì)胞株培養(yǎng)
MHCC-97L MHCC-97L細(xì)胞 細(xì)胞株培養(yǎng)
MHCC-97H MHCC-97H細(xì)胞 細(xì)胞株培養(yǎng)
3AO 3AO細(xì)胞 細(xì)胞株培養(yǎng)
A549 A549細(xì)胞 細(xì)胞株培養(yǎng)
SKOV3 SKOV3細(xì)胞 細(xì)胞株培養(yǎng)
HK-2 HK-2細(xì)胞 細(xì)胞株培養(yǎng)
KPL-4 KPL-4細(xì)胞 細(xì)胞株培養(yǎng)
IOSE80 IOSE80細(xì)胞 細(xì)胞株培養(yǎng)
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